隨著行業(yè)的發(fā)展，病毒載體的生產(chǎn)成為細胞和基因治療領域的核心技術.而轉(zhuǎn)染是將外源核酸導入真核細胞的過程，是細胞和分子生物學研究的重要工具，也是大部分的生物和分子生物領域的小伙伴離不開的話題。但是可能大家經(jīng)常聽到的抱怨是"轉(zhuǎn)染效率太低""轉(zhuǎn)染完細胞全漂了""轉(zhuǎn)染后忘記給細胞換液了"，真所謂辛辛苦苦實驗N多回，一夜回到解放前……

我們熟知的方法中脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染試劑包括中性脂質(zhì)體和陽離子脂質(zhì)體兩種。中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹DNA，借助脂質(zhì)膜將DNA導入細胞膜內(nèi)。目前應用比較廣泛的是帶正電的陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，方法操作簡單，重復性好，在體外轉(zhuǎn)染中有很高的效率，但具有一定的細胞毒性，可能會干擾細胞的代謝。且活性受血清影響，需要去除血清。

陽離子聚合物的轉(zhuǎn)染試劑，帶正電的聚合物與核酸帶負電的磷酸基團形成帶正電的復合物后與細胞表面帶負電的蛋白多糖相互作用，并通過內(nèi)吞作用進入細胞。其又分為樹枝狀陽離子聚合物和線性陽離子聚合物兩類，細胞毒性較小，但其轉(zhuǎn)染效率都高于脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染，適用也較為廣范。

陽離子聚合物 - 聚乙烯亞胺（PEI）是目前報道的工業(yè)化、大規(guī)模瞬時轉(zhuǎn)染表達重組蛋白領域泛使用的基因載體和轉(zhuǎn)染試劑。PEI 制備簡單，價格便宜，有線狀和枝狀兩種商業(yè)試劑可選，是瞬時轉(zhuǎn)染放大轉(zhuǎn)染試劑的*，是非常有潛力的非病毒質(zhì)粒載體試劑。

PEI Prime™?是美國SEROCHEM 公司研發(fā)的一 種高效、低毒、經(jīng)濟的新型轉(zhuǎn)染試劑。用于抗生素, 蛋白, 和病毒載體的轉(zhuǎn)染劑 - 聚乙稀亞胺(PEI)。PEI是的轉(zhuǎn)染方法并有效的用于在CHO和HEK細胞類型。

本轉(zhuǎn)染試劑操作簡單，5 分鐘實現(xiàn)快速轉(zhuǎn)染，在 HEK293T 細胞中轉(zhuǎn)染效率可達 95%以上。性價比高，適合常規(guī) 的轉(zhuǎn)染、蛋白表達、病毒包裝等大規(guī)模的轉(zhuǎn)染。

產(chǎn)品特點

高效、無毒：轉(zhuǎn)染效率高，重復性好，無明顯的細胞毒性；

操作簡單：使用方法和市面常見同類產(chǎn)品*一致；

應用廣泛：貼壁細胞和懸浮細胞都適用，即可瞬時轉(zhuǎn)染，也可穩(wěn)定轉(zhuǎn)染

操作步驟

以6孔板為例

1.  轉(zhuǎn)染用細胞準備：轉(zhuǎn)染前接種HEK293T細胞于合適的容器中，培養(yǎng)約24h，細胞密度70%-95% 為宜，活細胞密度為（1.5至2.0）x 10⁶細胞/ mL確保細胞處于狀態(tài) 。

2. 將活細胞密度稀釋至1.05 x 10⁶細胞/ mL；

3. 多次顛倒pDNA和PEI Prime™1 mg / mL試劑容器以充分混合。

4. 對于每個要轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)物，將1μgpDNA轉(zhuǎn)移至干凈的小瓶中。用新鮮培養(yǎng)基稀釋至40μg/ mL。

5. 對于每個要轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)物，將3μLPEI Prime™1 mg / mL轉(zhuǎn)移至干凈的小瓶中。使用培養(yǎng)基稀釋至120μg/ mL。

6. 將稀釋的pDNA和PEI Prime™混合在一起。倒轉(zhuǎn)幾次，讓其在室溫下靜置10分鐘。在使用前，輕輕將封閉的容器倒轉(zhuǎn)一次。

7. 每轉(zhuǎn)染95 mL培養(yǎng)物，使用5 mL pDNA / PEI混合物。混合時逐漸將混合物添加到培養(yǎng)物中。

8. 轉(zhuǎn)染后，培養(yǎng) HEK293T 細胞 18-72 小時后對細胞進行鑒定或加入抗生素篩選穩(wěn)定克隆。

                                                    HEK293T細胞轉(zhuǎn)染48h熒光圖

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